Inducción de la embriogénesis somática en hojas inmaduras de sacha inchi (plukenetia volubilis L.)

Abstract

With the objective of developing a suitable methodology for the sacha inchi (Plukenetia vo/ubilis L.) somatic embryogenic induction, explants of immature leaf of 25-26 mm were used, two study were evaluated, the first one consisted of the evaluation of the synchronization of the induction time, using 05 treatments with different concentrations of thidiazurón (0.000, 0.003, 0.005, 0.008, 0.010 mg/I), with base culture media of the mineral compounds M&S (1962) supplemented with Vit DKW, 2.0 mg/I 2,4-0, 2.0 g/I phytagel; the same media for the second study 12 treatments witch different cornbinations of two factors [citoquinina (thidiazurón) - times of induction] were evaluated. For the development of the somatic embryogenesis process and especially for the second study (MICE) three means of culture where used, media of induction of embryogenic callus, media of secondary growth of callus (MCSC) anda media of development of embroides (MDE). For the induction process of embryogenic callus of the first and second study, the explants were incubated in darkness, for the second study the secondary growth of callus the period of darkness was limited to 6 and 10 days respectively, to be cultivated aftermath in the culture media MEO for a time of 14 days in darkness and then submitted to light. The percentage of induction of callus evaluated in all the treatments of the first study demonstrates that up to 9 days of induction 100 % of callogenic reactivity exists, the growth of callus evaluated in all the treatments of the second study demonstrates that a proflt of average callus in 4.46 to 4.97 mg/day exists, the appearance of pro-embryonic globular stages of sacha inchi was confirmad in the T2, T4, T9 and T10, and the conformation of the first embryonic stage (globular stage) was confirmed in the T4. lt is necessary to mention that during the development of the process of somatic not embriogenic callus of creamy and crystalline thin irregular consistency were identified. The rhizogenesis as a product of the indirect organogenesis in the immature leaves was one of the most important observations of this investigation.

Con el propósito de desarrollar una metodología adecuada para la inducción de la embriogénesis somática sacha inchi (Plukenetia volubilis L.), se emplearon explantes de hoja inmadura de 25-26 mm, desinfectados por inmersión con alcohol etílico de 70° bajo tres segundos continuado por una desinfección con 0.5 % de NaOCI por un intermedio de diez minutos. Se evaluaron dos ensayos, el primero consistió en la evaluación de la sincronización del tiempo de inducción, utilizando 05 tratamientos con diferentes concentraciones de thidiazurón (0.000, 0.003, 0.005, 0.008, 0.010 mgn), acompañado de un medio de cultivo base constituido por los compuestos minerales M&S (1962) suplementado con Vit DKW, 2.0 mg/I 2,4-D, 2.0 g/I phytagel; de igual manera para el segundo ensayo se evaluaron 12 tratamientos con diferentes combinaciones de dos factores [citoquinina (thidiazurón) -tiempos de inducción (días)]. Para el desarrollo del proceso de la embriogénesis somática y en particular para el segundo ensayo se utilizaron tres medios de cultivo, medio de inducción del callo embriogénico (MICE), Medio de crecimiento secundario de callos (MCSC) y un medio de desarrollo de embroides (MDE). Para el proceso de inducción del callo embriogénico del primer y el segundo ensayo los explantes fueron incubados en oscuridad, para el segundo ensayo el crecimiento secundario de callos se acondiciono a un periodo de oscuridad de 6 y 1 O días respectivamente, para luego ser cultivados en el medio de cultivo MEO por un lapso de 14 días en condiciones de oscuridad y luego sometidos a luz. El porcentaje de inducción de callos evaluado en todos los tratamientos del primer ensayo demuestra que a los 9 días de inducción existe un 100% de reactividad callogénica, el crecimiento de callo evaluado en todos los tratamientos del segundo ensayo demuestra que existe una ganancia de callo promedio en 3.86 a 4.99 mg/día, la aparición de estadios globulares pro-embrionarios de sacha inchi se manifestaron los tratamientos T2, T4, T9 y T10, y la conformación del primer estadio embrionario (estadio globular) se manifestó en el tratamiento T 4. Cabe mencionar que durante el desarrollo del proceso de embriogénesis somática se identificaron callos no embriogénicos de consistencia cremosa y cristalino delgado e irregular. La rhizogénesis como producto de la organogénesis indirecta en las hojas inmaduras fue una de las más importantes observaciones en este trabajo de investigación.